Жилина А.А., Ларева Н.В., Лузина Е.В., Цвингер С.М., Морозова Е.И. Генетический полиморфизм интерлейкинов 10 и 12B у пациентов с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью. Профилактическая медицина. 2021;24(10):94–98.

Авторы: Жилина А.А. / Ларёва Н.В. / Лузина Е.В. / Цвингер С.М. / Морозова Е.И.

Генетический полиморфизм интерлейкинов 10 и 12B у пациентов с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью

РЕЗЮМЕ
Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ) в настоящее время является одним из наиболее распространенных заболеваний. Немаловажное значение в развитии и прогрессировании патологии имеют генетические механизмы.

Цель исследования. Изучение генетического полиморфизма ИЛ-10(1082G/A) и ИЛ-12B(1188A/C) у пациентов с ГЭРБ в зависимости от клинической картины заболевания и характера рефлюксата.

Материал и методы. В исследовании, проведенном с ноября 2018 г. по ноябрь 2020 г., принял участие 141 пациент: 80 пациентов с ГЭРБ (30 мужчин и 50 женщин), составивших основную группу, и 61 пациент без ГЭРБ, вошедший в контрольную группу (30 мужчин и 31 женщина). Медиана возраста пациентов составила 43 [33; 57] и 54 [37; 64] года в основной и контрольной группах соответственно (p=0,754). Группы были сопоставимы по половому составу (p=0,16). Диагноз ГЭРБ был установлен с использованием анкеты GerdQ (≥8 баллов), эндоскопического исследования пищевода, pH-импедансометрии. Респонденты обеих групп проживали в Забайкальском крае не менее трех поколений. Генотипирование полиморфного локуса G1082A ИЛ-10 и А1188С ИЛ-12B осуществляли методом полимеразной цепной реакции.

Результаты. Установлено, что генотип ИЛ-10(1082A/A) чаще встречался в группе пациентов с ГЭРБ (ОШ 9,189; 95% ДИ 2,050—41,195; p=0,0008). Распространенность аллеля A полиморфного локуса 1082G/A ИЛ-10 у пациентов с ГЭРБ также была выше, чем в контроле (ОШ 3,030; 95% ДИ 1,732—5,303; p=0,0001). Генотип ИЛ-10(1082A/A) был специфичен для пациентов с кислым рефлюксом (ОШ 4,266; 95% ДИ 0,872—20,860; p=0,0574). При изучении полиморфного локуса А11 88С ИЛ-12 не установлено статистически значимых различий в распространенности генотипов и аллелей между группой пациентов с ГЭРБ и контролем.

Вывод. У пациентов с ГЭРБ распространенность генотипа ИЛ-10(1082A/A) и аллеля A преобладает над группой контроля. Данный генотип характерен для пациентов с кислым характером рефлюкса.

Ключевые слова: гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь, рефлюкс-эзофагит, кислый рефлюкс, смешанный рефлюкс, pH-импедансометрия, полиморфизм интерлейкина 10, полиморфизм интерлейкина 12.

ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ:

Жилина А.А. — ht tps://orcid.org/0000-0002-4405-2975
Ларева Н.В. — ht tps://orcid.org/0000-0001-9498-9216
Лузина Е.В. — ht tps://orcid.org/0000-0002-8282-3056
Цвингер С.М. — ht tps://orcid.org/0000-0003-2082-9839
Морозова Е.И. — ht tps://orcid.org/0000-0002-2481-5189
Автор, ответственный за переписку: Жилина А.А. — e-mail: albina1228@ yandex.ru

КАК ЦИТИРОВАТЬ:

Жилина А.А., Ларева Н.В., Лузина Е.В., Цвингер С.М., Морозова Е.И. Генетический полиморфизм интерлейкинов 10 и 12B у пациентов с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью. Профилактическая медицина. 2021;24(10):94–98. ht tps://doi.org/10.17116/profmed20212410194

Genetic polymorphism of interleukins 10 and 12B in patients with gastroesophageal reflux disease

ABSTRACT
Gastroesophageal reflux disease (GERD) is currently one of the most common diseases. Genetic mechanisms play pivotal role in the development and progression of the disease.

Objective. To study genetic polymorphism of IL-10(1082G/A) and IL-12B(1188A/C) in patients with GERD depending on the clinical presentation of the disease and refluxate type.

Material and methods. The study was conducted between November 2018 and November 2020 and included 141 patients: the main group of 80 patients with GERD (30 males and 50 females) and the control group of 61 patients (30 males and 31 females) without GERD. The median age was 43 [33; 57] and 54 [37; 64] years in the main and control groups, respectively (p=0.754). The groups were comparable by sex (p=0.16). The diagnosis of GERD was made using the GerdQ questionnaire (8 or more points), endoscopic examination of the esophagus, and pH-impedancemetry. Subjects in both groups lived in Trans-Baikal Territory for at least three generations. Genotyping of polymorphic locus G1082A of IL-10 and A1188C of IL-12B was performed using polymerase chain reaction.

Results. The IL-10(1082A/A) genotype was shown to be more frequent in the group of patients with GERD (OR 9.189; 95% CI 2.050—41.195; p=0.0008). The prevalence of the allele A of the IL-10 polymorphic locus 1082G/A was also higher in patients with GERD than in controls (OR 3.030; 95% CI 1.732—5.303; p=0.0001). The IL-10(1082A/A) genotype was specific for patients with acid reflux (OR 4.266; 95% CI 0.872—20.860; p=0.0574). No statistically significant differences in the prevalence of genotypes and alleles of IL-12 polymorphic locus A1188C between the group of GERD patients and controls were observed.

Conclusion. In patients with GERD, the prevalence of the IL-10(1082A/A) genotype and the allele A is higher, than in the control group. This genotype is common in patients with acid type reflux.

Keywords: gastroesophageal reflux disease, reflux esophagitis, acid reflux, mixed reflux, pH-impedancemetry, interleukin 10 polymorphism, interleukin 12 polymorphism.

INFORMATION ABOUT THE AUTHORS:

Zhilina A.A. — ht tps://orcid.org/0000-0002-4405-2975
Lareva N.V. — ht tps://orcid.org/0000-0001-9498-9216
Luzina E.V. — ht tps://orcid.org/0000-0002-8282-3056
Zvinger S.M. — ht tps://orcid.org/0000-0003-2082-9839
Morozova E.I. — ht tps://orcid.org/0000-0002-2481-5189
Corresponding author: Zhilina A.A. — e-mail: albina1228@ yandex.ru

TO CITE THIS ARTICLE:

Zhilina AA, Lareva NV, Luzina EV, Zvinger SM, Morozova EI. Genetic polymorphism of interleukins 10 and 12B in patients with gastroesophageal reflux disease. The Russian Journal of Preventive Medicine. 2021;24(10):94–98. (In Russ.). ht tps://doi.org/10.17116/profmed20212410194

Введение

Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ) в настоящее время является одним из наиболее распространенных заболеваний. ГЭРБ редко приводит к смерти, однако она ассоциирована с высокой заболеваемостью и серьезными осложнениями, такими как изъязвление пищевода, пептическая стриктура, пищевод Барретта (ПБ), что позволяет рассматривать ее в качестве одного из ведущих факторов риска аденокарциномы пищевода [1]. Ключевой фактор патогенеза ГЭРБ — патологически высокая частота и/или длительность эпизодов заброса содержимого желудка в пищевод [2]. В последние годы патогенетические механизмы развития ГЭРБ и ее осложнений рассматриваются на тканевом и клеточном уровне. При изучении повреждений слизистой оболочки пищевода учитывается развитие воспаления, реализуемое через широкий спектр биологических медиаторов, включающих в себя вазоактивные амины и пептиды, компоненты комплемента, протеолитические ферменты, цитокины, факторы роста, продуцируемые как клетками иммунной системы (макрафаги, нейтрофилы, Т-лимфоциты), так и неиммунными — эпителиальными, мезенхимальными клетками. Немаловажное значение в развитии и прогрессировании заболевания имеют генетические механизмы. Доказательства генетической роли в эзофагите были получены при первых исследованиях с участием близнецов и при более поздних исследованиях генетических полиморфизмов [3]. В ряде исследований установлено, что аллель ИЛ1RN*2 и генотип ИЛ1RN2/2 являются независимыми факторами риска прогрессирования ГЭРБ, в том числе с развитием ПБ и аденокарциномы [4]. Ведутся работы по изучению роли полиморфизма генов интерлейкинов 10 (ИЛ-10) и 12 (ИЛ-12) в развитии и прогрессировании ГЭРБ, однако эти данные немногочисленны [5—10] и требуют дальнейшего изучения проблемы.

Цель исследования — изучение особенностей генетического полиморфизма ИЛ-10(1082G/A) и ИЛ-12B(1188A/C) у пациентов с ГЭРБ в зависимости от клинической картины заболевания и характера рефлюксата.

Материал и методы

В исследовании приняли участие 141 человек. В 1-ю группу вошли 80 пациентов с ГЭРБ (30 мужчин и 50 женщин), во 2-ю (контроль) — 61 человек без ГЭРБ (30 мужчин и 31 женщина); медиана возраста составила 43 [33; 57] и 54 [37; 64] года соответственно (p=0,754). Группы были сопоставимы по половому составу (p=0,16). Диагноз ГЭРБ был установлен пациентам с использованием анкеты GerdQ (Gastroesophageal Reflux Disease Questionnaire) (≥8 баллов) и/или при наличии изменений слизистой оболочки пищевода при проведении эндоскопического исследования верхних отделов желудочно-кишечного тракта, и/или при определении признаков заболевания при pH-импедансометрии. При формировании групп учитывали проживание респондентов в Забайкальском крае не менее трех поколений. Все респонденты, принявшие участие в исследовании, родились и проживают на территории края, участники как основной, так и контрольной группы охарактеризовали себя как европеоиды. В работе соблюдали этические принципы Хельсинкской декларации. Проведение исследования было одобрено локальным этическим комитетом при ФГБОУ ВО «Читинская государственная медицинская академия» (протокол №83 от 22.10.16).

Генотипирование полиморфного локуса G1082A ИЛ-10 и А1188С ИЛ-12B осуществляли методом полимеразной цепной реакции. Материалом для генетического анализа служили образцы ДНК, выделенные из лейкоцитов периферической венозной крови. Визуализация продуктов амплификации выполнена с помощью электрофореза в 3% агарном геле с добавлением бромистого этидия с ультрафиолетовой детекцией. В работе использованы стандартные наборы для исследуемых SNP научно-производственной фирмы «Литех» (Москва).

Накопление и обработку данных проводили с помощью программы MS Excel. Для статистической обработки использовали программу Statistica 10.0. Применяли методы непараметрической статистики (медиана и 25-й и 75-й процентили (Me [Q₂₅; Q₇₅], критерий Манна—Уитни, χ2, расчет отношения шансов (ОШ) с установлением 95% доверительного интервала (ДИ)). Оценку отклонения распределений генотипов изученного полиморфного локуса от распределения Харди—Вайнберга проводили с использованием модифицированного критерия χ2 Пирсона. Различия считали достоверными при p<0,05. В расчетах использована онлайн-программа «Hardy—Weinberg equilibrium calculator».

Результаты

Распределение частот генотипов полиморфного локуса G1082A гена ИЛ-10 и A1188C ИЛ-12B в изучаемых группах соответствовало закону Харди—Вайнберга (p>0,05).

При изучении полиморфизма гена ИЛ-10 у пациентов с ГЭРБ и в группе контроля выявлено три генотипа (G/G, G/A, A/A). Установлено, что генотип ИЛ-10 (1082G/G) чаще встречался в контрольной группе (ОШ 0,379; ДИ 95% 0,190—0,759), в отличие от генотипа A/A (ОШ 9,189; ДИ 95% 2,050—41,195). Распространенность аллеля A полиморфного локуса 1082G/A гена ИЛ-10 в 1-й группе была выше, чем во 2-й (ОШ 3,030; ДИ 95% 1,732—5,303) (табл. 1).

Изучение полиморфного локуса гена G1082A ИЛ-10 у пациентов с ГЭРБ показало, что генотип ИЛ-10(1082G/A) чаще наблюдался у пациентов со смешанным рефлюксом (ОШ 0,297; ДИ 95% 0,102—0,859) в отличие от генотипа ИЛ-10(1082A/A), который был специфичен для пациентов с кислым рефлюксом (ОШ 4,266; ДИ 95% 0,872—20,860). Не установлено статистически значимых различий между изучаемым полиморфизмом в зависимости от наличия изменений слизистой оболочки пищевода и при оценке клинических проявлений заболевания согласно опроснику GerdQ (табл. 2).

При изучении полиморфного локуса А1188С гена ИЛ-12 не выявлено статистически значимых различий в распространенности генотипов и аллелей между группами пациентов с ГЭРБ и контролем (табл. 3).

Изучение генотипов А1188С ИЛ-12 в группе пациентов с ГЭРБ не показало статистически значимых различий в зависимости от порогового значения баллов согласно опроснику GerdQ, изменения слизистой оболочки и характера рефлюксата (табл 4).

Обсуждение

ИЛ-10 — противовоспалительный, иммуносупрессивный цитокин, продукт гена человека ИЛ10. Этот цитокин имеет широкий спектр действия с выраженным иммуносупрессивным эффектом: подавляет пролиферацию и активность T-клеток, продукцию синтеза ряда цитокинов, снижает активность макрофагов и моноцитов. Снижает активность Th-1 в большей степени, чем Th-2. ИЛ-10 может стимулировать синтез иммуноглобулина E. У человека ген ИЛ10 находится на хромосоме 1 и содержит 5 экзонов: –3575, 2763, –082, –819 и 592. Проведены исследования по изучению трех промоторных полиморфизмов (–592C/A, –819 (C/T) и 1082 (A/G)) с восприимчивостью к разным заболеваниям [11]. У пациентов с ГЭРБ изучение полиморфизма генов ИЛ-10 проводилось в локусе 1082A/G. Учеными из Индии (2008 г.) установлено, что генотип ИЛ-10(1082A/A) является потенциальным фактором риска развития заболевания и его осложнений [5]. В настоящем исследовании генотип A/A также встречался чаще у пациентов с ГЭРБ, чем в группе контроля.

Ряд авторов проводили изучение полиморфизма генов этого цитокина у пациентов с разными формами ГЭРБ, включая осложненное течение заболевания (ПБ, аденокарцинома). Авторы из Нидерландов (2008 г.), которые изучали влияние полиморфизма генов цитокинов на ПБ у 255 пациентов с ПБ и 247 с рефлюкс-эзофагитом (РЭ), показали, что комбинации генотипа ИЛ-10(1082 A/A и A/G) были связаны с РЭ (ОШ 1,4; ДИ 95% 1,05—1,85; p=0,011) [6]. Аналогичные данные получены учеными из Великобритании (2005 г.), которые изучали полиморфизм генов ИЛ-10(1082A/G) у 456 пациентов с ГЭРБ. Все пациенты были разделены на 3 группы: имеющие эзофагит, ПБ без дисплазии, ПБ с дисплазией или аденокарциномой. Установлено, что ИЛ-10(1082A/A) чаще встречался у пациентов с ПБ и аденокарциномой, чем с эзофагитом. Авторы сделали вывод, что данный полиморфизм, наряду с демографическими показателями, может быть полезен в наблюдении за больными ГЭРБ [7]. В настоящем исследовании не получено статистически значимых различий у пациентов без признаков повреждения слизистой оболочки пищевода и при РЭ.

В литературе не обнаружено работ, посвященных изучению полиморфизма гена ИЛ10 в зависимости от характера рефлюксата. Однако результаты исследования показали, что у пациентов с кислым рефлюксом чаще встречался генотип ИЛ-10(1082A/A).

ИЛ-12 представляет собой противовоспалительный цитокин, который играет ключевую роль в стимулировании иммунного ответа Th1 в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта. Известно, что у лиц, инфицированных Helicobacter pylori, наблюдается повышенная экспрессия мРНК ИЛ-12 в слизистой оболочке желудка. В то же время изучение генотипов и полиморфизмов гена ИЛ12 у пациентов с язвенной болезнью не выявило различий в отношении локализации язвы, статуса Helicobacter pylori, использования нестероидных противовоспалительных препаратов, возраста, пола, эпизодов кровотечений и семейного анамнеза язвенной болезни [8]. Широко обсуждается связь полиморфизма гена ИЛ-12 с риском развития рака. Так, в метаанализе, посвященном изучению потенциальной роли полиморфизма гена ИЛ12 в возникновении рака, который включал 31 исследование с участием 10 749 больных раком и 11 921 здорового субъекта, установлено, что полиморфизм гена ИЛ-12B rs32112227 (AA по сравнении с AC+CC; p=0,004) являлся фактором риска развития онкологического процесса. Авторами сделан вывод, что определение полиморфизма ИЛ-12 возможно использовать как биомаркер предрасположенности к раку [9]. В исследовании из Китая проведено изучение связи полиморфизмов гена ИЛ-12A и ИЛ-12B с раком пищевода. В работе приняли участие 426 пациентов с раком пищевода и 432 респондента группы контроля. Установлено, что полиморфизмы генов ИЛ-12B (1188C/C и A/C) значительно связаны с риском развития рака пищевода. Кроме того, частота распространенности генотипов ИЛ-12B(1188C/C и A/C) была значительно выше у пациентов с низкой дифференцировкой. Авторы пришли к выводу, что ген ИЛ12B в своих полиморфных вариантах может способствовать развитию рака пищевода [10]. В то же время известно, что генотип ИЛ-12B(1188A/A) преобладает у пациентов с РЭ [5]. В настоящем исследовании около 1/2 (45%) пациентов с ГЭРБ имели генотип ИЛ-12B(1188A/C и C/C), что может свидетельствовать о наличии повышенного риска развития онкологического процесса. В исследовании не было получено статистически значимых различий в распространенности генотипов и аллелей ИЛ-12B(1188A/C) у пациентов с ГЭРБ в зависимости от клинических особенностей заболевания.

Вывод

У пациентов с ГЭРБ распространенность генотипа ИЛ-10(1082A/A) и аллеля A была выше, чем в группе контроля. Данный генотип характерен для пациентов с кислым характером рефлюкса.


Участие авторов: концепция и дизайн исследования — А.А. Жилина, Н.В. Ларева; сбор и обработка материала — А.А. Жилина; статистическая обработка — А.А. Жилина; написание текста — А.А. Жилина, Н.В. Ларева; редактирование — Е.В. Лузина, С.М. Цвингер, Е.И. Морозова.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
The authors declare no conflict of interest.

ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES

1. Лямина С.В., Маев И.В., Калиш С.В., Андреев Д.Н., Кладовикова О.В., Малышев И.Ю. Особенности функциональной активности макрофагального иммунитета при гастроэзофагеальной рефлюксной болезни в зависимости от типа рефлюктата: in vitro модель. Терапевтический архив. 2018;2:19-23.
   Lyamina SV, Maev IV, Kalish SV, Andreev DN, Kladovikova OV, Malyshev IYu. Features of the functional activity of macrophage link of immunity with gastroesophageal reflux disease depending on the type of reluctate: in vitro model. Terapevticheskii arkhiv. 2018;2:19-23. (In Russ.).
   ht tps://doi.org/10.26442/terarkh201890219-23
2. Ивашкин В.Т., Маев И.В., Трухманов А.С., Баранская Е.К., Дронова О.Б., Зайратьянц О.В., Сайфутдинов Р.Г., Шептулин А.А., Лапина Т.Л., Пирогов С.С., Кучерявый Ю.А., Сторонова О.А., Андреев Д.Н. Клинические рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации по диагностике и лечению гастроэзофагеальной рефлюксной болезни. Российский журнал гастроэнтерологии гепатологии, колопроктологии. 2017;27(4):75-95.
   Ivashkin VT, Mayev IV, Trukhmanov AS, Baranskaya YeK, Dronova OB, Zayratyants OV, Sayfutdinov RG, Sheptulin AA, Lapina TL, Pirogov SS, Kucheryavy YuA, Storonova O., Andreyev DN. Diagnostics and treatment of gastroesophageal reflux disease: clinical guidelines of the Russian gastroenterological Association. Ross z gastroenterol gepatol koloproktol. 2017;27(4): 75-95. (In Russ.).
   ht tps://doi.org/10.22416/1382-4376-2017-27-4-75-95
3. Picos A, Vulturar R, Picos A, Chis A, Chiorean I, Piciu A, Petrachescu N, Dumitrascu DL. Interleukin-1A and interleukin-1B gene polymorphisms in gastroesophageal reflux disease. Exp Ther Med. 2020;20(4):3394-3398.
   https://doi.org/10.3892/etm.2020.9030
4. Жилина А.А., Ларева Н.В., Лузина Е.В. Роль полиморфизма генов интерлейкина-lß и антагониста рецептора интерлейкина-1, инфекции helicobacter pylori и состояния слизистой оболочки желудка в развитии и прогрессировании гастроэзофагеальной рефлюксной болезни. Тихоокеанский медицинский журнал. 2020;4(82):44-48.
   Zhilina AA, Lareva NV, Luzina EV. The role of interleukin 1β and interleukin 1 receptor antagonist polymorphism genes, Helicobacter pylori infection and the state of the gastric mucosa in the development and progression of gastroesophageal reflux disease. Pacific Medical Journal. 2020;4(82):44-48. (In Russ.).
   https://doi.org/10.34215/1609-1175-2020-4-44-48
5. Chourasia D, Ghoshal UC. Pathogenesis of gastro-oesophageal reflux disease: what role do Helicobacter pylori and host genetic factors play? Trop Gastroenterol. 2008;29(1):13-19.
6. Moons LM, Kusters JG, van Delft JH, Kuipers EJ, Gottschalk R, Geldof H, Bode WA, Stoof J, van Vliet AH, Ketelslegers HB, Kleinjans JC, Siersema PD. A pro-inflammatory genotype predisposes to Barrett’s esophagus. Carcinogenesis. 2008;29(5):926-931.
   ht tps://doi.org/10.1093/carcin/bgm241
7. Gough MD, Ackroyd R, Majeed AW, Bird NC. Prediction of malignant potential in reflux disease: are cytokine polymorphisms important? Am J Gastroenterol. 2005;100(5):1012-1018.
   ht tps://doi.org/10.1111/j.1572-0241.2005.40904.x
8. Cherñavsky AC, Paladino N, Rubio AE, De Biasio MB, Periolo N, Cuarterolo M, Goñi J, Galoppo C, Cañero-Velasco MC, Muñoz AE, Fainboim H, Fainboim L. Simultaneous expression of Th1 cytokines and IL-4 confers severe characteristics to type I autoimmune hepatitis in children. Hum Immunol. 2004;65(7):683-691.
   ht tps://doi.org/10.1016/j.humimm.2004.03.004
9. Shi X, Jia Y, Xie X, Li S. Single-nucleotide polymorphisms of the IL-12 gene lead to a higher cancer risk: a meta-analysis based on 22,670 subjects. Genes Genet Syst. 2018;92(4):173-187.
   ht tps://doi.org/10.1266/ggs.16-00024
10. Tao YP, Wang WL, Li SY, Zhang J, Shi QZ, Zhao F, Zhao BS. Associations between polymorphisms in IL-12A, IL-12B, IL-12Rβ1, IL-27 gene and serum levels of IL-12p40, IL-27p28 with esophageal cancer. J Cancer Res Clin Oncol. 2012;138(11):1891-1900.
    ht tps://doi.org/10.1007/s00432-012-1269-0
11. Гурина О.П., Варламова О.Н., Мухитова Л.Ф. Интерлейкин-10. Биологическая роль и клиническое значение. University Therapeutic Journal. 2020;4(2):66-74.
    Gurina OP, Varlamova ON, Mukhitova LF. Interleukin-10. Biological role and clinical significance. University therapeutic journal. 2020;4(2):66-74. (In Russ.).

Назад в раздел